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灼烧多余菌体:①每次划线前灼烧接种环,杀灭环上残留菌种,逐步降低菌液浓度,从高浓度逐步稀释,最终长出单菌落;②防止残留菌体过多,划线后菌密度过大,菌落融合连片无法分离;③灼烧去除前一区残留杂菌,避免交叉污染不同分离菌株。划线不重叠:①重叠会把前区高浓度菌体带回低密度划线区,破坏梯度稀释效果,无法获得单菌落;②重叠造成局部菌量过载,菌落拥挤融合,达不到纯化菌种目的;③分区不重叠实现连续梯度稀释,逐步减少活菌数量,是单菌落分离关键操作。
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